都说“一入肿瘤深似海，从此抗癌不可能”。

可你知道肿瘤整垮/策反免疫细胞需要多久吗？具体流程是怎样的吗？

我猜你肯定不知道。

因为在今年12月之前，能跟踪体内免疫细胞随时间动态变化的技术还没诞生。

好在以色列魏茨曼科学研究所Ido Amit领衔的研究团队近日取得了突破，他们近日在顶级期刊《细胞》上发表了一项重磅研究成果，宣布这样的技术终于诞生了[1]。

他们发明了一个名为Zman-seq的新测序技术，基于这项技术，就可以知道体内的免疫细胞在什么时间去了哪里，发生了哪些变化。

基于Zman-seq，他们发现自然杀伤（NK）细胞进入胶质母细胞瘤24小时之内，就失去了抗肿瘤活性；而巨噬细胞入瘤后48小时之内就会被肿瘤策反，发挥抑制抗肿瘤免疫，促进肿瘤生长的作用。

更重要的是，他们还按照时间的顺序，详细分析了NK细胞和巨噬细胞入瘤后的变化过程。因此，这项研究取得的数据有望为癌症免疫治疗提供新的靶点或思路。

论文首页截图

Amit团队这项研究最关键的地方就是Zman-seq技术的开发。

接下来我就简单介绍下这个技术是如何实现的。

在开发这项技术的时候，Amit团队准备了可以标记外周血单个核细胞（PBMC）的五种荧光抗CD45抗体，这些抗体带有不同颜色的荧光标记以示区分。

这些荧光抗CD45抗体还有个特点，就是在未结合的状态下半衰期很短，在注射到血液之后，60分钟后就检测不到游离荧光抗体了。而那些结合到免疫细胞上的抗体，则随着免疫细胞进入各种组织。

随后，他们还借助于胶质母细胞瘤小鼠模型，探索了荧光抗CD45抗体的特异性。研究结果表明，无论是注射12、24、36小时，还是48小时之后，大脑中表达CD45的小胶质细胞都不会被标记。这意味着，荧光抗CD45抗体只能特异性标记循环中的免疫细胞，而无法标记已经进入肿瘤中的免疫细胞。

有了上面那些特异性结合的抗体，Amit团队就开始设计Zman-seq了。

他们的研究对象还是胶质母细胞瘤小鼠模型，他们在采集肿瘤组织样本的60小时之前，每隔12小时（60、48、36、24和12小时）注射一种荧光抗CD45抗体，最后采集肿瘤组织样本，并将获取的肿瘤细胞通过流式细胞荧光分选技术（FACS），分析每种免疫细胞进入肿瘤的时间。

举个例子来说，如果一个细胞不仅被采样前36小时时注射的荧光基团标记，还被采样前48和/或60小时注射的荧光基团标记，而没有出现24和12小时注射的荧光基团，则说明这个免疫细胞进入肿瘤时间在24小时之内。

示意图

这个方法是不是挺巧妙的。就是它让研究人员知道了免疫细胞进入肿瘤的时间。

随后的单细胞RNA测序（scRNA-seq）技术，能让研究人员知道细胞的身份。而将抗体标记技术与scRNA-seq技术一结合，就成了Zman-seq技术（Zman，是希伯来语中的“时间”，写法是זְמַן）。

有了Zman-seq之后，Amit团队开始分析胶质母细胞瘤中的免疫细胞，尤其是NK细胞和巨噬细胞。

从检测结果来看，在采样前12小时内进入肿瘤的NK细胞还表现出趋化性（S1pr5阳性）和细胞毒性（Prf1/Gzma/Gzmb阳性），而到采样前24小时到36小时之间时，肿瘤中富集的主要是功能失调的NK细胞（Itga1/Ctla2a/Gzmc阳性，且Prf1/Gzma/Gzmb水平较低）。

不难看出，NK细胞在入瘤后的24小时之内，就缴械投降了。

NK细胞失能的时间轴

随后，他们还在上述数据的基础上进一步描述了NK细胞从正常到功能障碍的分子轨迹。

NK细胞入瘤后，随时间变化的分子轨迹

采用同样的方法，Amit团队又分析了肿瘤中的“大户”——巨噬细胞。

从研究结果来看，巨噬细胞入瘤后虽然比NK细胞多坚持了一会儿，但也在48小时内被肿瘤策反，变成免疫抑制性细胞，发挥促进肿瘤生长的作用。

值得一提的是，他们还借助于Zman-seq技术分析了抗TREM2抗体改善巨噬细胞功能，促进其抗癌的机制。他们发现，阻断TREM2可以重编程单核细胞到调节性巨噬细胞变化轨迹，抑制巨噬细胞往促癌方向发展，还能对NK细胞等其他相互作用细胞产生继发性影响。

研究摘要示意图

这个发现对于指导临床用药顺序有一定的价值。例如，在使用其他的免疫检查点抑制剂之前，如果使用TREM2抑制剂，就可以先改善肿瘤免疫微环境，或许能提高免疫检查点抑制剂的治疗效果。

另外，Zman-seq技术还有一个潜在的使用场景，那就是帮助分析新辅助治疗后肿瘤中免疫环境的变化，以辅助临床研究人员开发出更好的治疗方案。

文章来源：奇点网