正常情况下，线粒体内膜电位较高，保持在负电位，而外膜电位较低，保持在正电位。当某些因素导致线粒体呼吸链电子传递过程障碍，影响基质内质子（H+）跨膜梯度的形成，就会导致外正、内负的线粒体膜电位下降，即去极化。大量研究表明，线粒体膜电位下降与自噬、凋亡或坏死等有关。线粒体膜电位功能障碍，甚至细微的异常变化，都可能极大地影响细胞内的生物活性，引起各种疾病（阿尔茨海默病、糖尿病和癌症等）。
因此，线粒体膜电位是评价线粒体正常功能的重要指标之一，不仅反映了线粒体功能的完整性，对TP的合成、离子的转运、细胞凋亡的调控以及抗氧化作用都具有重要的影响，同时也反映了细胞的健康状况，对细胞的生存和发展具有重要的意义。另外，检测线粒体膜电位的变化对生物学研究和医学诊断也具有重要意义。所以，我们应该重视线粒体膜电位的变化，并采取相应的措施来保护线粒体的正常功能。
JC-1单体的激发波长为488或514nm，发出绿色荧光，波长为529nm左右；JC-1聚合物的最大激发波长为585nm，发出红色荧光，波长为590nm左右。JC-1可以用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、荧光分光光度计或流式细胞仪检测。
1.细胞染色
1.1悬浮细胞
（1）细胞铺板：以6孔板为例，每孔用1mL培养基重悬100万细胞，其他培养器皿以此类推，也可根据自己的细胞类型选择合适的密度进行铺板。
（2）设置阳性对照：取适量CCCP处理细胞，细胞培养箱37℃孵育5min。
（3）JC-1染色：加入适量JC-1，细胞培养箱37℃孵育15min。一般情况，15min足以进行充分的染色。
（4）离心：37℃孵育结束后，400g 4℃离心3~4min，弃上清，注意尽量不要吸除细胞沉淀。
（5）洗涤：用1×PBS洗涤2次，400g 4℃离心3~4min。
（6）结果检测：再用500μL的PBS重悬细胞，用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察，也可以用荧光分光光度计或流式细胞仪分析（绿色荧光：Ex/Em=510/527nm；红色荧光：Ex/Em=585/590nm）。
1.2贴壁细胞
若用荧光分光光度计或流式细胞仪检测贴壁细胞，可先对贴壁细胞进行消化、收集，重悬后参考悬浮细胞的检测方法。若用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜检测：直接参考悬浮细胞实验步骤方法即可。
（2）JC-1是光敏感性的，所有染色步骤的操作过程中避免强光接触；未用完的储存液，避光保存，并避免反复冻融。
（3）JC-1染色完成后，应立即进行后续的结果分析，以减少各种可能的误差。
Zorova LD, Popkov VA, Plotnikov EY, et al. Mitochondrial membrane potential. Anal Biochem. 2017 Jul 1;552:50-59.
