目前已知的腺病毒有52种，分别命名为Ad1~Ad52，其中Ad5是目前常用于改造成复制缺陷的腺病毒载体（Adenoviral Vector，AdV）的一种，其基因组是一个线性的36kb的dsDNA分子。Ad5缺失了腺病毒早期表达的基因序列E1和E3，其中，E1是腺病毒复制所必须的，因此，E1缺失使Ad不能完成自身复制，只能依靠包装细胞提供的反式互补方式进行复制扩增；E3编码的是细胞表面的一种糖蛋白，可对抗宿主的抗病毒防御系统，因此，E3的缺失可减少宿主免疫反应。近年来，腺病毒载体作为一种常用的基因操作工具，已被广泛用于基础研究、疫苗载体及基因治疗研究领域。
（2）共转染HEK293细胞；
（3）腺病毒收集：一般在转染后7~10d出现病变（CPE），80%的细胞出现CPE时，收集细胞上清和细胞，进行反复冻融，离心，收集上清后滤膜过滤，-80℃保存；
（4）腺病毒扩增：一般在感染后2~3d出现80~90%CPE，收集细胞，进行反复冻融，离心，收集上清后滤膜过滤，-80℃保存；
（5）腺病毒浓缩和纯化：PEG8000浓缩法；
（6）重组腺病毒鉴定：病毒滴度、质粒残留、宿主DNA残留、BSA残留、支原体检测、衣原体检测、内毒素检测、细菌及真菌检测等。
（1）宿主范围广：常用于感染难感染的细胞，不仅可感染普通细胞系，也可感染悬浮细胞、原代细胞等，以及感染增殖细胞、非增殖细胞；
（2）感染效率高：病毒滴度可高达1011PFU/mL，能有效进行增殖，适用于基因治疗；
（3）载体容量大：最高可容纳8kb外源DNA；
（4）表达快：感染细胞后，1~2天即可表达，是研究原代细胞及悬浮细胞基因表达的最佳选择；
（5）致病性低，安全性高：AdV携带的基因组不整合到宿主细胞的染色体中，不干扰其他宿主基因。
（2）若短期（7d内）使用病毒液，4℃保存即可；若需长期不用，请置于-80℃保存。反复冻融会降低病毒滴度（每次冻融会使病毒滴度降低10%~50%），因此在病毒使用过程中尽量避免反复冻融。
（2）若操作时生物安全柜内有病毒污染（病毒液体溅出），立即用70%乙醇加1%的SDS溶液擦拭干净。
（3）腺病毒包装相关实验使用过的枪头、细胞培养皿、EP管和废弃物等用消毒剂消毒、灭菌后（84消毒液和高温灭菌），再进行统一处理。
（4）腺病毒包装相关实验完毕后，仔细清洁双手。
Jt S, M H, Wam B, et al. Adenoviral vectors for cardiovascular gene therapy applications: a clinical and industry perspective.[J]. J Mol Med (Berl), 2022;100(6):875-901.
Singh S, Kumar R, Agrawal B. Adenoviral Vector-Based Vaccines and Gene Therapies: Current Status and Future Prospects[M]. 2018.